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厌氧菌的甘油保藏方法

发布时间:2016-06-13 13:35 |  点击次数:

 
厌氧菌的甘油保藏方法: 

1、 厌氧甘油的制备: 厌氧瓶或厌氧管中放置一定量的甘油,甘油的量根据需要加入,不要多加,因为厌氧甘油制备好以后不能反复灭菌,反复灭菌甘油会变性而呈黄色,且有一股芳香味道。加入终浓度为0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厌氧瓶中通N2,通气时间和配制培养基时时间相同。盖上塞子和盖子。121 ℃, 20 min 灭菌后备用。 

2、 取新鲜菌液(对数期),在通N2 的情况下,用针筒和针头往有菌液的厌氧管中加入终浓度为15-20 %的厌氧甘油,再通一会N2,目的是赶走在转移甘油过程中带进去的O2。盖上塞子和盖子,混匀,冻于-80 ℃。 

3、 活化:用针头和针头吸取一定甘油保藏的菌液,加到培养基当中,加的量一般要多于1 %,因为厌氧菌的生物量比较小,一般2到5 %左右。目测加完甘油菌液的培养基是否浑浊,并作记录。如果加入的菌液太多,造成一开始培养基就比较浑浊,会干扰我们对菌是否生长的判断,而且甘油太多也会抑制菌的生长。