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如何拯救被污染的细胞

发布时间:2016-06-15 11:48 |  点击次数:

 夏天到了,细胞更容易被污染,很多养细胞的朋友在这方面困惑颇多,今天针对贴壁生长的细胞谈谈。 在讨论之前,大家首先要有一个概念,即洁净区,并不是没有细菌,而是细菌的数量非常少,在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。 所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!

对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);

污染处理流程

1、将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10 mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。

2、继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。

3、继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。

4、重复步骤3再洗。

5、重复步骤3再洗。

6、加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

7、加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

9、加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。

10、24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗。

11、24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。

 

若为霉菌或者真菌污染:

     加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。 其它操作同;

 

若为支原体污染有几种支原体清除剂

     1.BM-Cyclin(就是泰妙菌素+米诺环素)2.环丙沙星,这也是一种支原体较为敏感的抗生素,3.MRA,这个是商业化的支原体去除剂(Mycoplasma Removal Agent)是喹诺酮族抗生素的衍生物使用后发觉,采用泰妙菌素和米诺环素的效果更好些,支原体耐药率低,同时对细胞的抑制也较低。

 

除此还是需要你在无菌观念和无菌操作上下大功夫加强了,预防为主,还是要强调无菌操作,尤其注意血清的质量,这个是主要来源。

 

在操作的过程中,一定要小心操作动作,轻柔缓慢,切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的,我还是建议你把污染的扔掉,再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。