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T淋巴细胞转化实验的基本原理

发布时间:2016-06-30 13:58 |  点击次数:

 
T淋巴细胞转化实验的基本原理
     
T细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.
T 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.
淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT 法和同位素法三种.MTT 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法.MTT 是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色.小鼠脾细胞受到ConA 作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT 作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD 值,测定波长570nm.根据OD 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度.
3H-TdR 掺入法:细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核的复制,这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提.一般来说,一个细胞周期可大致分为四期,即G1 期、S期、G2 期和M期.其中S期为DNA合成期,主要功能活动为DNA合成.3H-TdR即(甲基-3H)胸腺嘧啶核苷([3H-methyl]thymidine),是DNA合成的前体.加入细胞培养液中后被细胞摄取作为DNA合成的原料.细胞合成的DNA越多,则所掺入的3H-TdR就越多,因此,检测所掺入的3H-TdR就可反映细胞增殖的程度.因该方法有同位素污染问题,故我们实习中仍用MTT法.