四、培养细胞生长不好

可能原因：

●细胞本身的状态

 

细胞传代次数多，细胞老化；

细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；

细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；

胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；

细胞的冻存与复苏：慢冻速融。

 

●污染

支原体污染

霉菌污染

●培养基或血清

 

更换血清或培养基之前未进行验证

选择的培养基是否合适

培养基配制是否准确无误

●培养环境

CO2供应是否正常

培养箱或摇床温度控制是否正确

…………

解决方法：

根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案

●注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；

●避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）

●要用合适的血清或培养基，最好经过验证

●注意实验室的环境

 

五、培养细胞死亡

可能原因： 

●培养箱内无CO2； 

●培养箱内温度波动太大； 

●细胞冻存或复苏过程中损伤； 

●培养液渗透压不正确； 

●培养液中有毒代谢产物堆积 

解决方法： 

●检测培养箱内CO2； 

●检查培养箱内温度； 

●取新的保存细胞种； 

●检测培养液渗透压； 

●换入新鲜培养液