（七）何时须更换培养基。培养基中是否须添加抗生素。

视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。一般正常培养状态下，培养基中可以添加抗生素。 按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL。

(八）贴壁细胞传代时所使用的 trypsin-EDTA 浓度及相应处理

一般使用的 trypsin-EDTA 浓度为 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于 –20 ℃，避免反复冷冻解冻造成 trypsin 的活性降低，并可减少污染的机会.。

（九）将一般动物细胞离心下来，离心速率多少

回收动物细胞，其离心速率一般为 1 000 rpm，5~10 分钟，过高的转速，将造成细胞死亡。

（十）细胞的接种密度

依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。

（十一）细胞冷冻培养基的成分及DMSO的等级

动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含 5~10% DMSO （dimethyl sulfoxide） 和 90~95 % 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意：由于 DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将 DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。冷冻保存使用的 DMSO 等级，必须为 Tissue culture grade 的 DMSO ，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中避光保存。

（十二）冷冻保存细胞的方法及冷冻细胞浓度

将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以含有DMSO完全培养基或胎牛血清的冻存液重悬细胞至终浓度约1x10⁶/ml。。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 

冷冻管内细胞数目一般为 1x10⁶ cells/ml vial，融合瘤细胞则以 5x10⁶ cells/ml vial 为宜。

（十三）如何避免细胞污染

细胞污染的种类可分成细菌、真菌、霉菌、病毒等。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。

（十四）支原体 （mycoplasma）污染的细胞， 对细胞培养有何影响

不能以肉眼观察出支原体污染异状。除极有经验的专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨。

支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数，代谢及研究任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为 mycoplasma-free，实验结果的数据方有意义。

（十五）培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，颜色会偏暗红色，且 pH 值会越来越偏碱性

培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，培养基内的 CO₂ 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂 （通常为 phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤 CO_{2 ，}以调整 pH 值。或酸碱调PH。

（十六）L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

（十七）什么培养基中可以省去加酚红？培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。